組織：原代組織有汙染 手術中汙染 細胞培養過程汙染與排除 - 趣味新聞網

原標題：細胞培養過程汙染與排除

1、汙染

空氣：操作淨化工作台,工作不帶口罩,外界氣流過強,溫度大,含菌

消毒：殘留汙物

操作：馬虎不準確，觀念不強

血清：檢測不嚴，支原體和病毒

組織：原代組織有汙染，手術中汙染，本身是汙染組織（潰爛的腫瘤，碘酒消毒後，擦試不淨。可能混入汙染）

2、汙染對細胞的影響

汙染時間短、輕，及時排除，細胞可能恢復。

輕：細胞生長緩慢、分裂相，細胞變粗糙，細胞輪 廓增強。

重：停止增殖,分裂相消失,胞質中齣現大量堆積物， 細胞變圓,崩潰並從瓶壁脫落 。

3、微生物：

支原體：無緻死毒性，可與細胞長期共存，對細胞影響潛在。

黴菌：

細菌：增殖快，短時間在數量上壓過細胞産生毒素殺死細胞。

病毒：

真菌：種類繁多，形態各異，呈白色或淺黃色小點，飄浮於培養液麵，肉眼可見。

鏡下：呈絲狀或管狀、樹枝狀絲，縱橫交錯穿行於細胞間。

支原體：介於細菌與病毒之間，能獨立生活的最小微生物無細胞壁，形態多樣，0.2um，可通過濾器圓形絲狀或梨形，在光鏡下很難看清結構。對青黴素普遍有抗藥性。

細胞受到支原體汙染後齣現以下情況：

嚴重：細胞增殖緩慢，部分細胞變圓，從瓶壁脫落。

輕：無明顯變化，或有微細變化由於傳代和換液而緩解觀察不夠細心或缺乏經驗，檢查不齣。

支原體檢測：

相差：油浸下觀察，暗色微小顆粒，有類似布朗運動，分布細胞錶麵和細胞之間。

值注：支原體與綫粒體相似，需加以區彆支原體染色Carnoy固定。

低張處理地依紅：地依紅2g冰醋酸60ml加水至100ml染色15分鍾脫水封固。

光鏡:支原體為暗紫色小體,附細胞外或散在細胞之間。

Hoechst33258:為DNA特異結閤的熒光探針，支原體DNA能被著色，是檢測支原體最方便、有效的一種方法。

醋酸:甲醇（1:3）固定，33258(50g/ml)染色10分鍾，漂洗後觀察。

工具：微孔濾膜： 能濾除支原體在內的粒子，處理受支原體汙染的培養液或血清，但不能去掉附於細胞錶麵的支原體。

藥物：溴尿嘧啶(Bromouracil)支原體的DNA也攝取溴尿嘧啶，用光照射，通過光敏效應殺滅支原體。

這款産品有如下幾個特點：

1、Water Shield可預防支原體、細菌、真菌、黴菌、孢子汙染。不含醛類或疊氮化物，成分安全，對細胞無毒害。

2、Water Shield與蒸餾水按1:200比例混閤，可直接加入培養箱水槽或水浴鍋中，使用起來很方便。

3、Water Shield含錶麵活性劑、季銨鹽和絡閤劑，不易揮發，在水中可保持4周有效作用時間。清洗水槽和換水的頻率由5天左右，可延長至28-30天左右，其間隻要定期往水槽加水即可，省時省力有效率。

目前有越來越多中國實驗室在自己的細胞間開始常規使用Water Shield。

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